PCR(polymerase chain reaction) :聚合酶鏈式反應,又稱體外DNA擴增技術。在模板DNA,4種游離脫氧核糖核苷酸存在情況下利用DNA聚合酶的功能,將待擴增DNA片段與其兩側互補的寡核苷酸鏈引物進行“變性——退火——延伸” 多次循環,從而在短時間內獲得大量所需目的基因片段。
師妹:DNA擴增條帶跑不出,很多非特異性條帶真的辣眼睛,片狀拖帶二度崩潰......
師兄:影響PCR實驗結果的原因有很多,下面這些需要注意:
1. 模板DNA降解,濃度過低了?
2. 引物設計不當降解了?特異性差?
3. 酶的質量有問題,加酶量過多?
4. PCR循環次數過多?
5. PCR儀循環次數過多?溫度不當?
6. Mg2+濃度過高或過低?
7. dNTP濃度過高或過低?
小為:工欲善其事,必先利其器,別看分子實驗操作相對簡單,影響因素卻很多,PCR耗材是一個非常重要,也極易被忽視的因素之一。
GENEVER
治愈你的PCR耗材選擇困難癥
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材質
PCR耗材通常由聚丙烯(Polypropylene,PP)制成,聚丙烯具有化學惰性,可最大限度的降低反應物質的吸收確保實驗得到最佳的PCR結果,且聚丙烯制成的耗材能夠承受PCR反應熱循環過程中的溫度不斷快速變化。另外自動化實驗室還需要用到雙材質(PP+PC)PCR耗材,某些qPCR板還會使用更強的聚碳酸酯制做邊框,從而提高PCR板邊框的機械穩定性。
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不同顏色的PCR板我應該怎么選呢?
PCR板通??梢蕴峁┒喾N顏色,一方面提供更好的辨識度,以便于對于樣品的視覺區分、頁面觀察等,特使是在高通量實驗中。另一方面提供更準確的檢測結果,通常以透明和白色為主,對于DNA擴增,塑料顏色對DNA擴增沒有影響,我們可推薦的產品種類較多,但在qPCR反應中,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色或磨砂透明的耗材,以實現靈敏和準確的熒光檢測。
白色耗材可通過阻止熒光折射出反應管來提高qPCR數據的靈敏度和一致性,折射被最小化時,更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比。此外,白色或磨砂管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀加熱模塊,避免被吸收或不一致的反射熒光信號。
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不同體積的PCR管/板,我該怎么選呢?平蓋 or凸蓋?
常見反應管規格及體積:
單管:0.2mL,0.1mL,0.5mL,靈活選擇樣品數
八聯排管:0.2mL,0.1mL
96孔板:0.2mL,0.1mL(高通量)
對于八聯排管或者96孔板,一般會區分高容量和低容量,即0.2mL和0.1mL,0.1mL也叫快速反應管或板。不同廠家有不用的叫法,以Bio-Rad為例,他們習慣性將0.1mL叫做Low-profile,0.2mL叫做High-profile,而國內則一般就叫0.1mL、0.2mL板或者管。
選擇平蓋還是凸蓋?
平蓋:qPCR的不二之選,為qPCR提供精確熒光傳遞,書寫標記。
凸蓋:更適合常規PCR,可與熱蓋接觸,減少變形,但是影響熒光傳遞,不適合qPCR使用。
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如何選擇裙邊?
PCR“裙邊”是為96孔板,384孔板設計的,可為反應體系構建時的移液過程提供較好穩定性,以及在自動化機械處理時提供更好的機械強度。包括無裙邊,半裙邊,全裙邊。
無裙邊板:周圍缺少面板,可適用于大多數的PCR儀或qPCR儀,不適用于自動化應用。移液過程中穩定性不高,需要配合板托使用。
半裙邊板:板周圍具有短的邊緣,可提供足夠支撐,且適配標簽或應用條碼,可用于自動化應用,較全裙板裝液量大。
全裙邊板:具有覆蓋板高度的邊緣面板,非常適用于自動化實驗應用,也可適配標簽及應用條碼。機械強度較好,可適用于凸出模塊的PCR儀,且移液過程中穩定性高。
Tab.不同類型裙邊性能對比
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切角
切角是PCR板的一個角缺失者兩個角缺失,取決于所需適配的機器。切角位置可位于,切角可能位于96孔板的A1、A12、H1或H12位置,或384孔板的A24或P24位置,一般的普通PCR儀對于切角沒有要求。
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PCR封板膜有很多類型,怎么選擇呢?
PCR實驗要求選用適配的高質量封板膜,不僅能有效地保護樣品,防止污染,還可以提供可信賴的實驗檢測數據。
qPCR高透膜:由高透光的塑料薄膜制成,一般有粘性膜和壓感膜兩種,每一種均可提供優良的透光率,確保實驗的準確性。
PCR膜:條膜密封8聯管,減少管蓋密封變形造成的漏液風險,經濟方便;板膜適合PCR,以及ELISA,ELA等顯色分析實驗,透光,適合光學和肉眼觀察。
PCR儲存膜:適合PCR,ELISA或者樣品儲存,可重復使用。也可-80度樣品保藏透明,可用于顯色分析或肉眼觀察。
GENEVER
Genever PCR Tubes&Plates高品質PCR耗材系列
PCR耗材
透明高分子聚丙烯制成,孔壁薄,厚度均勻,具有極好的熱傳導效應,結果可靠,重復性強。
密封性好,可有效減少樣品蒸發。
尺寸符合ANSI SBS標準,可用于自動化應用。
黑色字母標識,手動加樣時可快速識別樣本并溯源。
十萬級潔凈環境生產,專屬質量實驗室驗證測試,確保產品潔凈度。
每個孔都進行100%密封性能測試,確保樣本處理安全性。
無熱原,無內毒素,無DNA/RNA酶。
目前產品有單管(平蓋),八聯管(A款&B款),八聯排管,96孔板,384孔板5種規格,其中96孔板提供無裙邊、半裙邊,全裙邊,容量有0.1ml和0.2ml,顏色分為透明和白色兩種。
訂購信息
1
建諾為 PCR單管(平蓋)
2
建諾為 PCR八聯管
3
建諾為 PCR連蓋八聯排管
4
建諾為 PCR 96孔 PCR板
5
建諾為 384孔板
6
建諾為 PCR管架96孔
7
建諾為 PCR封板膜
建諾為生物技術(江蘇)有限公司
電話:4009968872
網址:www.11k29j.cn
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