1、產品特點
? 快速:整個操作過程快速方便,可縮短至10min。
? 多樣性:可回收單鏈,雙鏈DNA片段以及環裝質粒DNA。
? 大量回收、純度高:從各種瓊脂糖凝膠中回收多至 8 μg DNA(70bp-10Kb),回收率為 60-85%。瓊脂糖凝膠在溫和的緩沖液(DE-A 溶液)中熔化,其中的保護劑能防止線狀 DNA 在高溫下降解,然后在 DE-B 溶液的作用下使 DNA 選擇性結合到膜上。純化的 DNA 純度高,并保持片斷完整性和高生物活性,
? 下游應用:可直接用于連接、體外轉錄、PCR 擴增、測序、微注射等分子生物學實驗。
2、產品組分
3、保存條件
室溫(15-30℃)干燥條件下,可保存18個月。若溶液產生沉淀,可在37℃溫浴加熱至沉淀完全溶解,不影響效果。
FAQ
一、回收率低?
1) 目的片段含量低:
①瓊脂糖凝膠未完全熔化時目的片段只有部分結合到膜上,導致其余的片段在后續洗滌過程中丟失以及出現制備管堵塞現象,最終影響回收率。
此時建議:在切膠時盡可能去除不含目的片段的瓊脂糖,確保Buffer E1的正確用量。在熔膠過程中要仔細檢查,確保無固體瓊脂糖殘留,間隔性的對樣品進行搖晃促進凝膠的充分熔化。
②小于 400bp 的片段未加異丙醇。
此時建議務必確保已加入 1 倍凝膠體積的異丙醇(100%)。
③電泳緩沖液 pH 值過高,影響目的片段的結合。
此時建議加入 10μl 3M NaAC 中和。
2) 結合的 DNA片段過早的被洗脫。
Buffer W2 中未加無水乙醇,或者乙醇濃度不是95 -100%。
此時建議確保加入正確的乙醇量。每次使用后應擰緊瓶蓋,以免乙醇揮發,降低回收率。
3) 洗脫效率低。
①最后一次Buffer W2 洗滌完后不要將制備管放于負壓裝置上抽得過干。
②洗脫液或者去離子水 65℃ 預熱以及增加洗脫前靜置時間至 5min,都可提高洗脫效率。
③選用合適濃度的瓊脂糖凝膠電泳,上樣量不超過制備管的最大結合量(8μg)。
二、后續酶促反應不理想
1) 鹽污染
確保用Buffer W2 洗滌 2 次。
2) 乙醇污染
在最后一次Buffer W2 洗滌后可將制備管離心時間由原來 1min 增加至 2min。
3) 瓊脂糖殘留
切膠時盡可能去除不含有 DNA 片段部分的凝膠以便于對瓊脂糖的處理,確保瓊脂糖塊在 Buffer E1 中完全熔化。
4) 洗脫產物中含有ssDNA
將洗脫產物 95℃加熱 2min,慢慢冷卻至室溫,使單鏈 DNA 重新退火即可。